918博天娱乐官网提供的细胞培养指南如下，旨在确保细胞处理的最佳效果和生长状态。

培养条件

使用DMEM培养基，添加10% FBS和1% P/S进行贴壁培养。培养温度设置为37℃。初次传代建议1:2的比例进行。

传代方法

在细胞培养的第二天，需要换液。如有需要，建议同时购买细胞与培养产品，享受特别折扣。收到细胞后，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行处理。

使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞分别在40x、100x、200x倍镜下拍照以保存记录，前三天的照片将作为重要售后依据。如果不提供照片，默认接受的细胞状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞的汇合度未超过80%，则应将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并放于37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代。贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察，细胞大部分变圆后迅速轻敲培养瓶，添加超过5ml的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm反转5分钟，弃去上清，加入1-2ml的完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例分装至新T25瓶中，补充5-8ml的完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代

传代步骤包括：

1. 半换液法：将培养瓶竖立在培养箱中静置1小时，轻吸去约3ml培养基，然后加入3ml完全培养基，如培养基变色较慢，可直接添加约500μl FBS。在传代时直接补充5ml完全培养基于两个新瓶中，通常每3次传代后需离心去除死细胞。

2. 离心换液法：若需分瓶则将细胞悬液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬。然后按1:2比例分至新T25瓶中，加入6-8ml新的完全培养基以保持细胞活力，后续传代可根据实际情况采用1:2至1:5的比例。

c. 细胞冻存

步骤如下：

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后添加5ml完全培养基终止消化，轻吹使细胞脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。

4. 冻存细胞须直接放入-80℃冰箱，如后需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

d. 细胞复苏

复苏步骤包括：

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶出现，随后用75%酒精擦拭管外壁。

2. 将管中细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。

3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃，5% CO2培育。

4. 次日换用新鲜完全培养基继续培养。

918博天娱乐官网提醒您，运输过程中，某些细胞可能因贴壁不牢而发生脱落，属正常现象。如出现较多脱落情况，可将培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养，沉淀后补加胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心、弃去上清后重悬，按照1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。